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    1. NRPB52S 重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱

      发布日期:2018-10-27 阅读次数:2542

      品  名:重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

      英文名:Recombinant Protein L NUPharose Fast Flow, rProtein L NUPharose FF

      目录号:NRPB52L、NRPB52S(预装柱)

      规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

      运  输:2 ~ 25℃,常压、避光

      贮  存:20%乙醇,2-8℃

      保质期:3年


      相关介绍:

      重组蛋白L琼脂糖凝胶FF是将重组大消化链球菌蛋白L(Recombinant Peptostreptococcus magnus Protein L,简称r-PPL)偶联在高度交联的琼脂糖凝胶上的一种亲和纯化介质。大消化链球菌蛋白L(PPL)能与抗体的κ轻链结合而不会影响抗体的抗原结合位点,这一特性使其与结合抗体Fc区域的蛋白A、蛋白G相比,能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。如人类的IgG、IgM、IgA、IgE、IgD,以及含κ轻链(人类1、3、4型,小鼠1型)的Fab、scFv等抗体片段。但不能与重链、λ轻链、κ轻链(2型)结合,所以重组蛋白L琼脂糖凝胶FF不能纯化牛、山羊、绵羊、鸡来源的抗体。


      技术指标:

      基质

      4%高度交联琼脂糖凝胶

      配基

      重组蛋白L

      配基密度

      6 mg/ml

      填料粒径

      60~180 μm

      最大流速

      800 cm/h

      推荐流速

      20-100 cm/h

      工作(清洗)pH

      2~9(2~10)

      0.3 MPa

      载量

      40 mg/ml human IgG


      抗体与蛋白A、蛋白G的结合力:

      种类

      Species

      亚型

      Antibody Class

      蛋白A

      Protein A

      蛋白G

      Protein G

      蛋白L

      Protein L

      Human

      IgG1

      IgG2

      IgG3

      IgG4

      IgM

      IgD

      IgA

      Fab

      +++

      +++

      +

      +++

      +

      -

      +

      +

      +++

      +++

      +++

      +++

      -

      -

      -

      +

      +++

      +++

      +++

      +++

      +++

      +++

      +++

      +++

      小鼠

      Mouse

      IgG1

      IgG2a

      IgG2b

      IgG3

      IgM

      +

      +++

      +++

      +++

      -

      ++

      +++

      +++

      +++

      -

      +++

      +++

      +++

      +++

      +++

      大鼠

      Rat

      IgG1

      IgG2a

      IgG2b

      IgG2c

      +

      -

      -

      +++

      ++

      +++

      +

      +++

      +++

      +++

      +++

      +++

      Cow

      IgG1

      IgG2

      +

      +++

      +++

      +++

      -

      -

      山羊

      Goat

      IgG1

      IgG2

      +

      +++

      +++

      +++

      -

      -

      Horse

      IgG(ab)

      IgG(c)

      IgG(T)

      +

      +

      -

      -

      -

      +++

      NA

      NA

      NA

      Rabbit

      IgG

      +++

      +++

      +

      Pig

      IgG

      +++

      +

      +++

      Dog

      IgG

      +++

      +

      NA

      Chicken

      IgY

      -

      -

      -

      注:-表示不结合;+表示微弱结合;++表示中等结合;+++表示很强结合;NA表示暂无数据。能用于亲和纯化的抗体一般需要中等以上的结合力。


      应用举例:

      结合缓冲液:20 mM磷酸盐缓冲液(PB),pH 7.4

      洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,pH 2.7

      中和缓冲液:1 M Tris-HCl,pH 9.0

      1)1 ml重组蛋白L琼脂糖凝胶FF预装柱,用5~10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

      2)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积;

      3)将3 ml小鼠腹水用结合缓冲液稀释至15 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;

      4)用结合缓冲液平衡 5~10个柱床体积至基线;

      5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;

      6)每次使用后再用3~5个柱床体积的洗脱缓冲液再生清洗;

      7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的小鼠单抗纯度在95%以上。



      注意事项:

      1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。

      2)样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HCl,pH 9.0) 将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5%~20%、pH 7-9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。

      3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。

      4)通常目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH 2.0~2.7)洗3~5个柱体积,然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上,作简易再生。

      5)使用数次后应进行在位清洗,建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1-3个柱体积(10~30min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上;或70%乙醇洗5个柱体积以上(可保持4~16h),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上;或10mM NaOH洗1-3个柱体积(10-20min),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类,恢复柱子的载量和流速。

      导购指南

      中文名

      英文简称

      货号

      规格

      产品描述

      重力预装柱

      重组蛋白L琼脂糖凝胶FF重力预装柱

      ProL NUPharose FF pre-packed column

      NRPB52S-Z11

      1*1mL

      1支*1ml

      NRPB52S-Z41

      4*1mL

      4支*1ml

      NRPB52S-Z15

      1*5mL

      1*5mL

      NRPB52S-Z25

      2*5mL

      2支*5mL

      AKTA中压预装柱

      重组蛋白L琼脂糖凝胶FF中压预装柱

      ProL NUPharose FF pre-packed column

      NRPB52S-Y11

      1*1mL

      1支*1ml

      NRPB52S-Y41

      4*1mL

      4支*1ml

      NRPB52S-Y15

      1*5mL

      1*5mL

      NRPB52S-Y25

      2*5mL

      2支*5mL

      填料

      重组蛋白L琼脂糖凝胶FF

      ProL NUPharose FF

      NRPB52L-10

      10mL

      1瓶*10ml

      NRPB52L-20

      20mL

      1瓶*20ml

      NRPB52L-100

      100mL

      1瓶*100ml

      NRPB52L-500

      500ml

      1瓶*500ml

      注:sungame生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积


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