sungame

    1. NRPB58L Ni-TED琼脂糖凝胶FF

      发布日期:2018-10-27 阅读次数:2764

      品  名:Ni-TED琼脂糖凝胶FF

      英文名:Nickel Tris(carboxymethyl)ethylenediamine NUPharose Fast Flow, Ni-TED NUPharose FF

      目录号:NRPB58L、NRPB58S(预装柱)

      规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

      运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

      贮  存:20%乙醇,2 ~ 25℃

      保质期:5年


      相关介绍: 

      Ni-TED琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质,通过活化偶联三羧甲基乙二胺(TED),再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸(IDA)相比,Ni-TED琼脂糖凝胶FF具有很好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性,如样品中含有10-100mM EDTA或10-100mM β-巯基乙醇或5-20mM DTT,均可正常纯化;无需脱镍,也可以用1M NaOH再生清洗。


      Ni-TED琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键,因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质,结合了His-Tag重组蛋白的Ni-TED琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。


      技术指标:

      基质

      6%琼脂糖凝胶

      配基

      -N(CH2COOH)CH2CH2N(CH2COOH)2

      配基密度

      30 μmol/ml

      填料粒径

      60~180 μm

      最大流速

      800 cm/h

      推荐流速

      50-100 cm/h

      pH稳定性

      pH 3-12(清洗pH 2-14

      0.3 MPa

      载量

      20 mg His-tag重组蛋白/ml 


      使用方法:

      1、色谱柱装填

      (1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。

      (2)在柱子下端加入蒸馏水,以除去柱子中的空气,关闭柱子出口,在柱内保留少量的蒸馏水。

      (3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时,要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降。

      (4)柱压不超过0.3MPa,如果装柱系统中无法测柱压,则正常流速下填装。

      (5)填装好的Ni-TED琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液平衡,建议流速100cm/h,平衡后的柱子可以用于His-Tag重组蛋白的上样和洗脱纯化。

      2、上样

      (1)缓冲液选择:一般选用pH6-8的结合缓冲液,常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除离子交换作用。在初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF,推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液。

      (2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致,可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液(常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等)、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

      3、洗脱

      (1)Ni-TED琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。

      (2)咪唑为碱性,相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH。

      (3)在初次使用Ni-TED琼脂糖凝胶FF,不知道洗脱的咪唑浓度,建议在结合缓冲液中分别加入10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑,浓度从低到高,分别洗脱和收集,通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份。

      (4)有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱,确定较佳洗脱条件。

      4、在位清洗

      使用完的层析柱出现堵塞、压力增大、流速减慢、载量下降等情况时,就需要进行在位清洗。Ni-TED琼脂糖凝胶FF的优势为无需脱镍即可用1M NaOH再生清洗,所以清洗最常用的方法:使用完的层析柱用蒸馏水清洗3-5个柱体积,然后用1M NaOH清洗3-5个柱体积(保持时间0.5-1h),然后用蒸馏水清洗至中性即可。同其它层析介质一样,为了达到更好的清洗目的,可以采用反向清洗;如需去除热源,可在1M NaOH中保持更长时间(1-2h)。

      除了NaOH清洗外,强电荷蛋白可以用1-2M NaCl进行清洗;脂类、脂蛋白、强疏水蛋白可以用30%异丙醇(或70%乙醇)进行清洗。

      导购指南

      中文名

      英文简称

      货号

      规格

      产品描述

      重力预装柱

      Ni-TED琼脂糖凝胶FF重力预装柱

      Ni-TED  NUPharose FF pre-packed column

      NRPB58S-Z11

      1*1mL

      1支*1ml

      NRPB58S-Z41

      4*1mL

      4支*1ml

      NRPB58S-Z15

      1*5mL

      1*5mL

      NRPB58S-Z25

      2*5mL

      2支*5mL

      AKTA中压预装柱

      Ni-TED琼脂糖凝胶FF中压预装柱

      Ni-TED  NUPharose FF pre-packed column

      NRPB58S-Y11

      1*1mL

      1支*1ml

      NRPB58S-Y41

      4*1mL

      4支*1ml

      NRPB58S-Y15

      1*5mL

      1*5mL

      NRPB58S-Y25

      2*5mL

      2支*5mL

      填料

      Ni-TED琼脂糖凝胶FF

      Ni-TED  NUPharose FF

      NRPB58L-10

      10mL

      1瓶*10ml

      NRPB58L-20

      20mL

      1瓶*20ml

      NRPB58L-100

      100mL

      1瓶*100ml

      NRPB58L-500

      500ml

      1瓶*500ml

      注:sungame生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积



          1. sungame
            sungame地图 地图